四种含有野生型海肾荧光素酶的载体,用于报告基因实验中的标准化
T7启动子位于Rluc基因上游,便于体外合成海肾荧光素酶
SV40晚期poly(A)信号序列置于Rluc下游,以确保有效的转录终止和mRNA多聚腺苷酸化
原核复制起点和β-内酰胺酶基因使得pRL载体能够在大肠杆菌宿主菌株中选择性增殖
pRL载体系列为野生型海肾荧光素酶(Rluc)对照报告载体。该系列载体可实现海肾荧光素酶的组成型表达,可与萤火虫荧光素酶载体共转染哺乳动物细胞。海肾荧光素酶的表达可提供内参基准值,用于标准化实验性萤火虫荧光素酶报告基因的表达水平。pRL载体包含从珊瑚虫纲海洋生物海肾(学名Renilla reniformis)中克隆得到的海肾荧光素酶(Rluc)编码cDNA。
本系列提供四种不同启动子配置:HSV-胸苷激酶启动子(pRL-TK)活性较弱,特别适用于需要中性组成型表达海肾荧光素酶对照报告基因的实验;SV40早期增强子/启动子区(pRL-SV40)和CMV即时早期增强子/启动子区(pRL-CMV)通常驱动高效转录,因此可能不适用于含强效调控元件的实验载体共报告系统。建议在目标细胞中验证特定共报告组合的性能。pRL-null载体不含启动子,提供多克隆位点供插入目标调控区域,也可根据实验需求作为无启动子元件对照载体使用。
除改造后的Rluc报告基因外,所有pRL载体均从dam–/dcm–缺陷型E. coli K宿主菌株中分离,确保对dam和dcm甲基化敏感的限制性内切酶可有效酶切。
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