利用识别序列或单杂交实验结合核受体的载体
创建与 pFN26（BIND）结合的融合结合域hRluc-neo Flexi®载体并与pGL4.35载体配合使用luc2P9XGAL4[无人机系统/湿度]矢量
pGL4.36载体中的小鼠乳腺肿瘤病毒长末端重复序列露西2P/MMTV/Hygro] Vector评估雄激素或糖皮质激素反应
雌激素受体配体结合域（pBIND-ERα）和糖皮质激素受体配体结合域（pBIND-GR）已完成克隆
可通过传统方法进行核受体分析，使用带有上游核受体响应元件的最小启动子载体。此外，也可选用病毒元件如小鼠乳腺肿瘤病毒长末端重复启动子，置于pGL4.36载体中。露西2P/MMTV/Hygro] 用于判断雄激素或糖皮质激素反应的载体。在许多情况下，使用这些方法需要具备相应内源性核受体的细胞系，这意味着针对每种核受体研究可能需要不同的细胞系。然而，有人采用酵母双杂交系统原理开发出适用于核受体研究的方法——将核受体配体结合域与pFN26A(BIND)载体中的GAL4 DNA结合域进行融合。hRluc-新Flexi®载体与pGL4.35共转染露西2P9XGAL4[UAS/Hygro] Vector，一种萤火虫荧光素酶报告载体，包含最小启动子上游的GAL4上游激活序列重复片段。配体结合域负责配体结合、同源或异源二聚化以及与共激活因子或共抑制因子的相互作用。单杂交方法允许您使用任何所需的细胞系和核受体。两种含雌激素受体配体结合域（pBIND-ERα）和糖皮质激素受体配体结合域（pBIND-GR）的pFN26A载体可用于单杂交方法。
基于GAL4的系统消除了内源性受体的背景信号，优化的9X GAL4 UAS通过更高的信噪比提升了细胞反应。该组合雷尼拉新霉素标记物可与双荧光素酶报告系统兼容实现标准化，也可作为筛选标记用于构建稳定细胞系，二者共用同一载体。这种单杂交检测体系意味着仅需一套实验系统即可对所有核受体进行对比分析与特征描述。该体系采用经过稳定性优化改造的露西2P荧光素酶基因在报告基因检测中具有更高的灵敏度和更短的诱导时间。
应用
发现核受体配体与调节剂。
药物发现/高通量筛选
癌症研究
炎症研究。
环境毒理学。
粤公网安备 44031102000815号
