商品名称:SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads) #9002
SimpleChIP®酶解法染色质免疫沉淀试剂盒(琼脂糖珠)#9002包含进行最多6次染色质制备和30次染色质免疫沉淀所需的缓冲液与试剂,其优化条件适用于每次实验4×10⁶个细胞。完整实验流程可在短短两天内完成,并可根据细胞数量灵活调整规模。
实验流程如下:首先用甲醛固定细胞并进行裂解,随后通过微球菌核酸酶部分消化将染色质片段化为1-5个核小体长度。相较于超声破碎法,这种酶解法具有更温和的特性,既能避免超声功率波动导致的问题,又能防止超声过程中染色质乳化造成的不完全片段化或蛋白质变性降解引起的抗体表位丢失。免疫沉淀步骤采用经ChIP验证的抗体及ChIP级蛋白G琼脂糖珠完成。解除蛋白质-DNA交联后,使用DNA纯化离心柱进行DNA纯化,无需酚/氯仿抽提和乙醇沉淀即可高效回收DNA并去除蛋白质污染物。免疫沉淀富集的特定DNA序列可通过标准PCR或实时定量PCR等多种方法进行分析。需特别说明的是,由于ChIP级蛋白G琼脂糖珠使用超声处理的鲑鱼精子DNA进行封闭处理,该试剂盒不适用于ChIP-seq实验,因其会干扰后续测序。
SimpleChIP®试剂盒还提供确保实验成功的关键对照体系:包含阳性对照组蛋白H3抗体、阴性对照正常兔IgG抗体,以及用于检测人和小鼠核糖体蛋白L30(RPL30)基因的PCR引物组合。组蛋白H3作为染色质核心组分,可结合基因组中绝大多数DNA序列(包括RPL30基因座),因此组蛋白H3抗体可作为通用阳性对照,理论上能富集几乎所有待测基因位点。